完美真人
CD274基因敲除Hela细胞
CD274基因敲除细胞Hela是由完美真人优化的CRISPR/Cas9编辑而成，，，，接纳Sanger测序法验证敲除，，，，包管单克�。。。。。钚杂乓�。。。。。 更多
货号 : EDC08222
数目
产品属性
| 货号 | EDC08222 |
|---|---|
| 产品名称 | CD274 Knockout Hela Cell Line |
| 细胞 | Hela |
| 基因 | CD274 |
| 基因ID |
29126
|
| 基因又名 | ADMIO5|B7-H|B7H1|PD-L1|PDCD1L1|PDCD1LG1|PDL1|hPD-L1 |
| 细胞形态 | Adherent |
| 传代比率 | 1/5, 2days |
| 完全作育基 | MEM + 10% FBS |
| 冻存作育基 | 70%完全作育基+ 20% FBS+ 10% DMSO |
STR 判断
| Loci | 送检细胞STR信息 送检细胞名: Hela |
细胞库细胞STR信息 细胞库细胞名: Hela |
||
| Allele1 | Allele2 | Allele1 | Allele2 | |
| Amelogenin | X | X | ||
| CSF1PO | 9 | 10 | 9 | 10 |
| D1S1656 | 12 | 15 | 12 | 15 |
| D2S1338 | 17 | 17 | ||
| D3S1358 | 15 | 18 | 15 | 18 |
| D5S818 | 11 | 12 | 11 | 12 |
| D6S1043 | 18 | 18 | ||
| D7S820 | 8 | 12 | 8 | 12 |
| D8S1179 | 12 | 13 | 12 | 13 |
| D12S391 | 20 | 25 | 20 | 25 |
| D13S317 | 12 | 14 | 12 | 14 |
| D16S539 | 9 | 10 | 9 | 10 |
| D18S51 | 16 | 16 | ||
| D19S433 | 13 | 14 | 13 | 14 |
| D21S11 | 27 | 28 | 27 | 28 |
| FGA | 18 | 21 | 18 | 21 |
| Penta D | 8 | 15 | 8 | 15 |
| Penta E | 7 | 17 | 7 | 17 |
| TPOX | 8 | 12 | 8 | 12 |
| VWA | 16 | 18 | 16 | 18 |
结论：该细胞 STR 判断准确。。。。。
细胞苏醒要领
注重：收到的细胞如 24h 内苏醒，，，，可存放于-80℃冰箱；；；；凌驾 24h 请存放于液氮中，，，，苏醒前 10min 取出，，，，放于-80℃，，，，让管中液氮挥发。。。。。
1．水浴锅 37℃预热；；；；
2．适合该细胞系的完全作育基温浴到 37℃；；；；
3．在 15mL 离心管中加入 6mL 完全作育基备用；；；；
4．从-80℃冰箱中取出细胞，，，，在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，，，，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，，，，使细胞在 1min 内迅速解冻（水不可没过盖子或用封口膜把冻存管口封上）；；；；
5．将冻存管转移到超净事情台内；；；；翻开盖子前，，，，用 75％酒精擦拭冻存管外部；；；；
6．用移液枪吸收细胞冻存悬液，，，，转移至已预热的完全作育基的离心管内；；；；
7．用 1mL 完全作育基洗涤冻存管 1 次，，，，网络残留细胞，，，，镌汰损失；；；；
8． 细胞悬液以 1100rpm 离心 4min（离心速率和时间取决于细胞种类）
9．离心后，，，，检查上清液是否清亮，，，，有无完整的细胞沉淀；；；；在无菌条件下，，，，小心倒掉上清液，，，，加入 1mL 完全作育基，，，，轻柔奏乐细胞沉淀，，，，充分吹散、混匀；；；；
10．将细胞平均接种到 1 个 T25 作育瓶或底面积相当的作育容器中。。。。。加入足量完全作育基，，，，1 个 T25 作育瓶中作育基总量不少于 6mL（现实作育瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数目）；；；；
11．摇匀细胞，，，，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（作育情形取决于细胞和作育基类型）；；；；
12．苏醒越日，，，，视察细胞状态。。。。。
（1）贴壁细胞若细胞贴壁情形优异，，，，可以替换新鲜的完全作育基；；；；若视察到细胞呈圆亮形态但不贴壁，，，，可以让细胞继续作育 24h 后再举行换液操作。。。。。之后，，，，凭证细胞的生长状态，，，，每2-3 天替换一次完全作育基，，，，视察细胞，，，，生长至 80％以上的汇合度，，，，即需传代。。。。。若细胞生长较慢或汇合度较低时，，，，可以镌汰换液次数。。。。。
（2）悬浮细胞苏醒后只管放在相对小一些的容器中，，，，使用含 20％血清的作育基苏醒。。。。。悬浮细胞若细胞状态优异，，，，可以替换新鲜的完全作育基；；；；若细胞状态差且泛起灰度，，，，可以继续作育 8366h 后再视察细胞。。。。。视察发明有活细胞，，，，可举行换液操作，，，，视察细胞无显着转变，，，，实时反响本公司售后。。。。。
细胞传代要领
1．将完全作育基、PBS、胰酶预热至 37℃；；；；
2．从作育容器中吸弃上清；；；；
3．从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS（T25 作育瓶加入约 6mL）洗涤细胞 1 次。。。。。注重行动轻柔，，，，洗濯周全，，，，阻止搅动细胞层，，，，前后摇晃容器数次吸去 PBS（注：冲洗办法可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；；；；
4．加入胰酶（T25 作育瓶加入约 3mL），，，，迅速铺匀，，，，包管充分接触细胞外貌。。。。。放入作育箱消化；；；；
5．显微镜下视察消化情形，，，，约 70％～80％细胞缩短变圆后，，，，轻拍作育容器外壁，，，，使细胞脱离作育外貌；；；；
6．立即加入 2 倍胰酶体积的完全作育基（T25 作育瓶加入约 6mL），，，，随即轻摇作育容器，，，，使作育基和胰酶迅速混匀，，，，终止消化；；；；
7．使用移液管吸收细胞悬液，，，，奏乐作育容器底面数次，，，，尽可能将细胞都奏乐下来；；；；注重：吹感行动不可强烈，，，，阻止爆发大宗气泡，，，，损伤和损失细胞。。。。。
8．将细胞悬液转移至离心管中。。。。。用 PBS（T25 作育瓶加入约 3mL）洗涤容器 1 次，，，，网络残留细胞；；；；
9．网络的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min；；；；
10．离心后去除上清。。。。。加入 1mL 完全作育基，，，，轻柔奏乐细胞沉淀，，，，充分吹散、混匀；；；；
11．将细胞按一定的比例传代接种，，，，建议首次凭证 1：3 举行传代，，，，若细胞在两天内长满可增添传代比例，，，，若细胞生长三四天还未长满，，，，可适当缩小传代比例；；；；
注重：请凭证细胞现实生长情形调解传代比例。。。。。
12．摇匀细胞，，，，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（若是使用作育瓶，，，，将其放入作育箱前应将瓶盖旋松，，，，以便举行充分的气体交流，，，，除非您使用的是通气式作育瓶和透气性瓶盖）；；；；
13．传代越日，，，，视察细胞状态。。。。。若发明较多死细胞，，，，举行换液操作。。。。。之后，，，，每凭证细胞的生长情形替换完全作育基，，，，视察细胞，，，，生长至 8374％以上的汇合度，，，，即需传代或冻存。。。。。
贮存条件
液氮生涯
