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基因敲除细胞
效劳详情
| 细胞类型 | 种种细胞类型，，，，，包括肿瘤、通例、干细胞、原代和永生化细胞系。。。。 |
|---|---|
| 效劳类型 | 单基因敲除/多基因敲除/移码突变/片断敲除 |
| 交付标准 | 基因敲除单克隆细胞≥1株（2管细胞/株，，，，，1×106/管） |
| 周期/价钱 |
快至4周，，，，，6980元起  ? 在线咨询 |
效劳优势
高效的sgRNA设计
高性能的Cas9卵白
高效的细胞转染
细胞筛选无忧
效劳类型
| 单基因敲除 | 实现单个基因的有用敲除 |
|---|---|
| 多基因敲除 | 实现多个基因的有用敲除 |
| 移码突变 | 针对编码基因的编码区前端设计sgRNA，，，，，实现碱基非3的倍数的indel |
| 片断敲除 | 针对基因设计sgRNA，，，，，实现基因片断的删除 |
效劳流程
乐成案例
研究目的：HEK293细胞的单基因敲除
项目目的：乐成高效敲除HEK293细胞系中的A基因，，，，，为后续功效研究提供稳健的模子
项目设计： sgRNA 设计于A基因的第2号外显子
研究目的：在Huh6细胞中实现准确的小片断敲除
项目目的：乐成在Huh6细胞中敲除A基因的小片断，，，，，导致目的基因功效的损失
项目设计： 在huh6 细胞中，，，，，针对A基因的编码区设计两条sgRNA，，，，，实现片断敲除。。。。
研究目的：在THP-1细胞中实现双基因敲除
项目目的：乐成在THP-1细胞中同时敲除B基因和C基因，，，，，从而开展基因相互作用及代偿机制的研究。。。。
项目设计：在B基因外显子区域设计2个sgRNA，，，，，C基因外显子区域设计2个sgRNA。。。。
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
参考文献
NGP和CHP-134 NB细胞系中敲除ATM基因
神经母细胞瘤（Neuroblastoma, NB）是一种常见的儿童实体瘤，，，，，临床体现和预后具有高度的异质性，，，，，只管接纳了多种治疗策略，，，，，但高危害NB患者的肿瘤对标准治疗保存对抗性，，，，，并可能生长成转移。。。。ATM基因与DNA损伤反应有关，，，，，位于11q的ATM基因的杂合性缺失和ATM基因的半合性突变在NB肿瘤中是互斥的。。。。在NB细胞系中，，，，，ATM的敲低已被证实可以在体外和体内增进肿瘤形成，，，，，但ATM与肿瘤形成和癌症侵袭性之间的关联尚不清晰。。。。
研究职员使用CRISPR/Cas9技术敲除了NGP和CHP-134 NB细胞系中的ATM基因，，，，，剖析ATM基因敲除细胞的增殖和集落形成能力，，，，，Western blot检测与DNA修复途径相关的差别卵白的表达，，，，，并在ATM基因敲除细胞中稳固转染FANCD2表达质粒以过表达FANCD2，，，，，免疫荧鲜明微确定卵白表达情形。。。。效果显示，，，，，ATM的缺失导致FANCD2卵白水平下降，，，，，完全ATM基因敲除细胞对PARP抑制剂奥拉帕尼体现出更高的敏感性，，，，，在ATM基因敲除细胞中重新引入FANCD2表达，，，，，可以恢复细胞的增殖能力。。。。ATM基因敲除细胞展现了ATM基因杂合性在神经母细胞瘤中的作用机制，，，，，并剖析了ATM失活怎样增强NB细胞对奥拉帕尼治疗的敏感性，，，，，对治疗显示ATM基因剂量和侵袭性癌症希望的高危害NB患者具有主要意义。。。。
Swan71细胞系中敲除BRCA1基因
在早期胎盘发育中，，，，，肿瘤抑制基因和癌基因配合事情，，，，，以一种受控的方法调理细胞增殖和分解。。。。BRCA1是一个已知的肿瘤抑制基因，，，，，它与ZNF350和CtIP形成复合体，，，，，连系到HMGA2基因的启动子区域，，，，，阻止其转录。。。。这种调控在癌症细胞中已有研究，，，，，但在胎盘细胞中的研究较少。。。。
研究职员使用CRISPR-Cas9系统在Swan71细胞系中敲除BRCA1基因，，，，，天生了BRCA1基因敲除（BRCA1 KO）细胞，，，，，通过熏染Swan71细胞与含有miR-182过表达构建的慢病毒颗粒，，，，，使miR-182在细胞中过表达。。。。效果显示，，，，，与野生型细胞相比，，，，，BRCA1 KO细胞显示出显著增添的HMGA2 mRNA和卵白水平；；；；；miR-182的过表达导致BRCA1卵白水平下降，，，，，HMGA2卵白水平上升。。。。BRCA1基因敲除细胞批注BRCA1在调理滋养层细胞中的HMGA2水平方面施展主要作用，，，，，并且可能通过影响细胞凋亡加入胎盘的发育和功效，，，，，为明确BRCA1在胎盘发育中的作用提供了新的视角。。。。
MDA-MB-231乳腺癌细胞中敲除成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）
成纤维细胞生长因子（Fibroblast Growth Factor, FGF）—成纤维细胞生长因子受体（Fibroblast Growth Factor Receptor, FGFR）信号轴是介导肿瘤基质与癌细胞之间相互作用的主要信号传导途径之一，，，，，FGFR1的激活可以通过转位、点突变或FGFR1基因的扩增导致癌症恶化。。。。别的，，，，，G卵白偶联雌激素受体（GPER, GPR30）也被确以为介导雌激素在多种病理心理条件下作用的受体。。。。
为探索GPER怎样通过FGF2/FGFR1信号轴介导CAFs与乳腺癌细胞之间的通讯，，，，，研究职员使用了CRISPR/Cas9基因编辑技术来敲除MDA-MB-231乳腺癌细胞中的成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1），，，，，正常比照组中来自雌激素刺激的癌症相关成纤维细胞（CAFs）的条件作育基（CM）能够诱导FGFR1野生型（WT）MDA-MB-231细胞中CTGF（结缔组织生长因子）的表达，，，，，并通过FGFR1-ERK1/2-AKT信号通路增进细胞的迁徙和侵袭。。。。而在FGFR1基因敲除的MDA-MB-231细胞中，，，，，这种诱导作用则显著降低或消逝。。。。FGFR1基因敲除细胞展现了GPER在肿瘤微情形中调理FGF2表达的新角色，，，，，证实了FGFR1在乳腺癌中的基因扩增与患者的整体存活率亲近相关，，，，，批注FGFR1可能作为乳腺癌治疗的一个靶点，，，，，剖析了CAFs与乳腺癌细胞之间的旁渗透激活作用，，，，，为开发新的治疗策略提供了理论基础。。。。
皮肤鳞状细胞癌细胞（SCC）中敲除BRD4基因
近年来，，，，，皮肤鳞状细胞癌的发病率以惊人的速率上升，，，，，皮肤鳞状细胞癌和其它非玄色素瘤皮肤癌每年都会导致大宗的人类殒命。。。。统计研究批注，，，，，凌驾20%的世界生齿在一生中可能会生长成皮肤癌，，，，，现在的治疗选择包括手术、放疗和/或化疗的组合，，，，，但关于晚期和/或转移性皮肤鳞状细胞癌的预后仍然不令人知足。。。。最近的癌症研究提出BRD4可能是一个潜在的致癌卵白，，，，，但其在皮肤鳞状细胞癌中的表达和生物学功效尚未被研究。。。。
研究职员开展了分子靶向治疗的研究，，，，，使用CRISPR/Cas9系统直接敲除BRD4基因。。。。BRD4基因的敲除或默然显著降低了皮肤鳞状细胞癌细胞（SCC）的增殖能力，，，，，导致SCC细胞中几个与细胞增殖亲近相关的癌基因（如cyclin D1、Bcl-2和MYC）的表达显著下降。。。。在体内实验中，，，，，通过CRISPR/Cas9介导的BRD4基因敲除显著抑制了A431细胞在严重联合免疫缺陷（SCID）小鼠中的肿瘤生长。。。。BRD4基因敲除细胞为进一步的临床研究和药物开发提供了科学依据，，，，，有助于开发针对BRD4的分子靶向治疗药物。。。。
精选客户文章
Deep whole-genome analysis of 494 hepatocellular carcinomas
全球凌驾一半的肝细胞癌（HCC）病例爆发在中国，，，，，但现在针对中国人群中乙型肝炎病毒（HBV）相关HCC的全基因组剖析研究很是有限。。。。为了突破这种限制，，，，，研究职员启动了“中国肝癌图谱项目”（CLCA），，，，，旨在对中国人群中的HCC举行大规模的全基因组剖析以明确其奇异的发病机制和进化历程。。。。该项目对494例HCC肿瘤样本举行了深度全基因组测序（平均测序深度为120×），，，，，并剖析了匹配的比照血液样本，，，，，展现了HBV相关HCC的详细基因组特征。。。。研究发明，，，，，除了已知的编码区驱动基因（如TP53和CTNNB1）外，，，，，还保存6个新的编码区驱动基因（包括FGA）和31个非编码区驱动基因。。。。别的，，，，，研究还展现5种新的突变特征（包括SBS_H8），，，，，以及HBV整合形成细胞外环状DNA（ecDNA）的征象，，，，，这些ecDNA可导致癌基因扩增和表达增添。。。。通过功效验证实验，，，，，研究职员证实了FGA、PPP1R12B和KCNJ12等基因的突变能够显著影响HCC细胞的增殖、迁徙和侵袭能力。。。。这项研究效果不但富厚了人们对HCC基因组学的明确，，，，，也为HCC的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。。。。
候选驱动因子概况
Targeted Macrophage CRISPR-Cas13 mRNA Editing in Immunotherapy for Tendon Injury
肌腱损伤急性炎症期中，，，，，巨噬细胞太过激活会导致编码骨桥卵白OPN的SPP1过表达，，，，，影响组织再生。。。。CRISPR-Cas13由于具有RNA编辑和快速降解的能力，，，，，在组织修复方面具有重大潜力，，，，，但缺乏合适有用的递送要领。。。。对此，，，，，研究职员系统筛选了针对巨噬细胞的阳离子聚合物，，，，，开发了一种能够高效递送Cas13核糖核卵白复合物（Cas13 RNP）进入巨噬细胞的纳米簇载体。。。。通过反应性氧种（ROS）响应性释放机制，，，，，该系统能够在肌腱损伤的急性炎症微情形中特异性抑制巨噬细胞中SPP1的过表达。。。。实验效果批注，，，，，这种靶向策略显著镌汰了损伤诱导的SPP1爆发巨噬细胞的泛起，，，，，降低了成纤维细胞的激活，，，，，并减轻了肌腱周围的粘连形成。。。。别的，，，，，该研究还展现了SPP1通过CD44/AKT信号通路增进成纤维细胞活化和迁徙的机制，，，，，并通过抑制这一通路有用缓解了肌腱损伤后的粘连问题。。。。
用于PA治疗的巨噬细胞免疫微情形激活mRNA编辑策略的示意图
Electrical stimulation of piezoelectric BaTiO3 coated Ti6Al4V scaffolds promotes anti-inflammatory polarization of macrophage and bone repair via MAPK/JNK inhibition and OXPHOS activation
脊髓损伤（SCI）是一种导致感受自主神经和运动功效的永世性损害的严重致残性疾病。。。。干细胞疗法，，，，，尤其是间充质干细胞（MSCs），，，，，在SCI治疗中展现出重大潜力但其再生能力有限，，，，，这限制了其在组织再生中的应用。。。。研究团队视察到ABPCs衍生的EVs（EVsABPC）可能携带增进组织再生的生物活性信号，，，，，因此他们从鹿角芽基祖细胞（ABPCs）中提取并修饰了细胞外囊泡（EVsABPC），，，，，并将其应用于脊髓损伤（SCI）的治疗研究。。。。研究职员发明EVsABPC能够显著增强神经干细胞（NSCs）的增殖，，，，，增进轴突生长，，，，，镌汰神经元凋亡，，，，，并通过调理炎症反应将巨噬细胞从促炎的M1型极化为抗炎的M2型。。。。别的，，，，，经由工程化刷新的EVsABPC（通过激活细胞穿透肽修饰）能够更有用地靶向SCI损伤部位，，，，，显著改善神经再生和运动功效恢复。。。。这些效果批注，，，，，EVsABPC是一种极具潜力的SCI治疗候选计划。。。。
图解摘要
Generation of recombinant antibodies by mammalian expression system for detecting S-metolachlor in environmental waters
S-异丙甲草胺（S-MET）是我国生产和使用量最大的除草剂之一，，，，，其化学特征导致其可在土壤中长期保存以及容易通过淋溶和沉降污染地表水和地下水，，，，，最终影响植物生长和通过食物链危害人类生命康健。。。。鉴于现有检测要领的局限性和对高效剖析技术的迫切需求，，，，，该研究以S-metolachlor为工具，，，，，使用哺乳动物表达系统天生相关重组抗体。。。。在乐成表达抗体的基础上，，，，，乐成建设了基于这些抗体的免疫剖析要领，，，，，用于监测情形水样中的S-异丙甲草胺残留。。。。icELISA效果显示，，，，，重组抗体的迅速度和特异性与亲本单抗相似，，，，，可坚持原有的生物学活性，，，，，关于江水、农田水和自来水中的S-MET，，，，，具有优异的准确性和重复性。。。。
图解摘要
Dumbbell probe initiated multi-rolling circle amplification assisted CRISPR/Cas12a for highly sensitive detection of clinical microRNA
细小RNA（miRNA）是一类小的非编码RNA分子，，，，，通过与特定靶基因的信使RNA（mRNA）相互作用来调控基因表达。。。。miRNA在多种疾病的爆发、生长历程中饰演着主要角色，，，，，被以为是极具潜力的疾病生物标记物。。。。该研究使用CRISPR/Cas12a开发了一种为DBmRCA的新型miRNA检测技术。。。。该技术使用无毗连酶的哑铃探针和高迅速度的CRISPR/Cas12a信号输出策略，，，，，实现了在30分钟内对miRNA的高精度定量剖析。。。。研究团队通过临床样本验证了该技术的有用性，，，，，发明miR-200a和miR-126在肺癌组织中的表达水平显著降低，，，，，且该技术与古板要领效果一致。。。。DBmRCA技术具有时间效率高、迅速度强和操作流程简化等优点，，，，，为临床miRNA剖析提供了一种可靠的工具，，，，，有望助力肺癌的早期诊断和治疗。。。。
图解摘要
