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基因敲入细胞
敲入细胞系是通过在目的基因的特定位点精准插入外源 DNA 片断（如荧光标签、报告基因或致病突变序列），，，在坚持基因自然调控情形的同时，，，实现对基因功效和卵白表达的可控修饰。。。相比于古板过表达系统，，，敲入模子能更真实地反应内源性基因的表达水平和调控机制，，，是研究 基因功效、疾病机制和药物作用 的主要工具。。。
完美真人依托自主优化的 CRISPR/Cas9 与 HDR 技术平台，，，连系高效同源臂设计与单克隆筛选流程，，，为客户提供定制化敲入细胞系效劳。。。完美真人计划具有 高效率、低脱靶率、验证周全 等优势，，，确�；；；；；；竦梦裙炭煽康南赴Ｗ�。。。效劳详情
| 细胞类型 | 种种细胞类型，，，包括肿瘤、通例、干细胞、原代和永生化细胞系。。。 |
|---|---|
| 效劳类型 | 荧光卵白定点敲入（EFGP、Luc、mCherry等）/ 标签卵白定点敲入（Flag、HA、Myc、HiBiT等）/ 目的基因特定位点敲入 / 基因点突变 |
| 交付标准 | 基因敲入单克隆细胞1株（2管细胞，，，1×10^6/管） |
| 周期/价钱 |
快至8周，，，16800元起  ? 在线咨询 |
技术原理
| 技术类型 | 效率 | 优点 | 适用场景 | |
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| CRISPR/HDR | 5-30% | 无邪性高，，，支持点突变和片断插入 | 破碎较活跃细胞 |
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CRISPR/HDR技术原理CRISPR/HDR是一种依赖CRISPR系统和细胞HDR修复机制实现基因敲入的基因编辑技术。。。sgRNA识别并连系目的基因位点，，，在Cas9核酸酶的作用下切割DNA双链，，，含同源臂的DNA供体模板在细胞HDR修复机制的作用下，，，整合至sgRNA切割位点中，，，实现准确的基因敲入。。。
CRISPR/HDR技术优势 无邪性高可通过调解sgRNA和Donor模板，，，在差别位置实现对外源基因序列的敲入
 精准度高pegRNA携带的编辑信息确保了敲入片断的准确性，，，镌汰了脱靶和非预期编辑
CRISPR/HDR技术流程
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| CRISPaint | 20-50% | 不依赖细胞周期 | 破碎周期长的细胞 |
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CRISPaint技术原理CRISPaint是一种基于CRISPR-Cas9系统的基因敲入技术，，，通过使用细胞自身的非同源最后毗连（NHEJ）修复机制，，，能够在指定的基因C端位置敲入外源DNA片断，，，无需依赖同源重组（HDR）。。。CRISPaint的设计具有高度的无邪性，，，适用于多种基因功效研究和基因组编辑应用。。。1、CRISPR-Cas9指导的双链断裂（DSB）
3、非同源最后毗连（NHEJ） 
CRISPaint技术优势 高效性NHEJ介导基因敲入，，，无需同源臂，，，插入效率高达50%
 适用规模广不依赖于细胞破碎，，，适用于多种细胞类型
 无邪性通用Donor质粒包括3种Donor-sgRNA靶点序列，，，无邪选择Frame sgRNA质粒，，，实现基因ORF序列准确整合
CRISPaint实验流程
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| BingoPE™ | 30-80% | 无DSB或供体模板，，，脱靶危害低 | 精准敲入小片断或点突变修复 |
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Bingo™技术原理Bingo™ 是一种基于Prime Editing介导小片断敲入的基因编辑技术，，，能够在不依赖DNA双链断裂的情形下，，，实现对目的基因的精准编辑。。。该技术的焦点在于使用融合了逆转录酶的Cas9 nickase（Cas9n-RT），，，在pegRNA指导下识别编辑位点，，，通过Cas9n在编辑位点爆发单链切口，，，逆转录酶使用pegRNA的模板序列在单链切口位置合成新的DNA序列，，，从而实现精准的基因敲入。。。
Bingo™技术优势 更清静PE技术通过单链切割实现编辑，，，阻止了DSB带来的不稳固性，，，显著提高了编辑的清静性
 高准确性pegRNA携带的编辑信息确保了敲入片断的准确性，，，镌汰了脱靶和非预期编辑
 多功效性能够实现小片断DNA的插入（如终止密码子、标签序列等），，，适用于多种基因组编辑需求
Bingo™实验流程
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| HES-KI | 40%-90% | 奇异筛选机制介导高效敲入 | 主要基因位点C端敲入 |
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HES-KI技术原理HES-KI（主要基因位点敲入）是一种新型的敲入技术，，，通过在主要基因的C端外显子区域举行CRISPR编辑，，，并设计一个转基因敲入模板，，，使得乐成敲入的细胞能够恢复主要基因的功效，，，同时整合敲入的基因序列；；；；；；若是未乐成敲入细胞，，，如NHEJ介导的有插入或缺失（indels）的细胞，，，将导致主要基因功效损失，，，使细胞无法存活，，，从而实现对乐成敲入细胞的富集。。。 HES-KI技术优势 高效率通过正向选择机制，，，阻止非特异性敲入，，，提高敲入效率，，，在多种细胞类型中实现高达68%的敲入效率，，，远超古板技术
 稳固且均一敲入单克隆细胞中目的基因表达稳固且均一
 多基因整合可同时敲入多个基因，，，例如，，，敲入多个CAR基因，，，周全靶向多种肿瘤抗原，，，镌汰肿瘤逃逸
 调控能力强通过选择差别的主要基因，，，可无邪调解目的基因表达水平
HES-KI技术流程
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乐成案例
基于HES-KI系统的AsCas12a介导的EGFP基因敲入
基于HES-KI系统的CRISPR/Cas9介导的EGFP基因敲入
| 293T | CHO-K1 |
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使用先导编辑在Hela细胞中构建碱基插入细胞系
| 细胞类型 | cell pool 编辑效率 | 测序峰图 | 挑选单克隆数目 | 单克隆纯合子数目 |
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| Hela | 64% | WT:TCCGCTACCACCAATGCCTAATGCATTTGG MT:TCCGCTACCACCAATGCTAATAACTAATGCATTTGG  |
11 | 1 |
Advantage and Characteristic
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
Optimazied Strategy
参考文献
通过同步细胞周期来增强CRISPR介导的同源重组修复（HDR）效率
该研究探讨了通过同步细胞周期来增强CRISPR介导的同源重组修复（HDR）效率的要领。。。使用小分子调理细胞周期，，，在种种细胞系中实现了1.2-1.5倍的KI效率提高。。。研究还展示了该要领在动物胚胎中的应用，，，显著提高了猪胚胎中的KI频率。。。这一要领通过调理细胞进入有利于HDR的周期阶段，，，从而提高了基因敲入的乐成率，，，为CRISPR基因编辑提供了新的优化策略。。。
基于CLASH技术的基因敲入策略
CLASH（Cas9-Linked Adaptor Synthesis for Homology-directed repair）技术能够在大规模细胞工程中实现高效的基因敲入。。。该要领连系了Cas9卵白和适配子合成，，，使得在多种细胞类型中举行平行敲入成为可能。。。通过在DNA修复历程中提供特定的适配子来提高同源重组修复（HDR）的效率，，，从而大大提升基因敲入的乐成率。。。该技术展示了在细胞工程和基因编辑中的重大潜力，，，特殊是在需要多基因修改的重大生物工程应用中。。。
精选客户文章
Deep whole-genome analysis of 494 hepatocellular carcinomas
全球凌驾一半的肝细胞癌（HCC）病例爆发在中国，，，但现在针对中国人群中乙型肝炎病毒（HBV）相关HCC的全基因组剖析研究很是有限。。。为了突破这种限制，，，研究职员启动了“中国肝癌图谱项目”（CLCA），，，旨在对中国人群中的HCC举行大规模的全基因组剖析以明确其奇异的发病机制和进化历程。。。该项目对494例HCC肿瘤样本举行了深度全基因组测序（平均测序深度为120×），，，并剖析了匹配的比照血液样本，，，展现了HBV相关HCC的详细基因组特征。。。研究发明，，，除了已知的编码区驱动基因（如TP53和CTNNB1）外，，，还保存6个新的编码区驱动基因（包括FGA）和31个非编码区驱动基因。。。别的，，，研究还展现5种新的突变特征（包括SBS_H8），，，以及HBV整合形成细胞外环状DNA（ecDNA）的征象，，，这些ecDNA可导致癌基因扩增和表达增添。。。通过功效验证实验，，，研究职员证实了FGA、PPP1R12B和KCNJ12等基因的突变能够显著影响HCC细胞的增殖、迁徙和侵袭能力。。。这项研究效果不但富厚了人们对HCC基因组学的明确，，，也为HCC的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。。。
候选驱动因子概况
Targeted Macrophage CRISPR-Cas13 mRNA Editing in Immunotherapy for Tendon Injury
肌腱损伤急性炎症期中，，，巨噬细胞太过激活会导致编码骨桥卵白OPN的SPP1过表达，，，影响组织再生。。。CRISPR-Cas13由于具有RNA编辑和快速降解的能力，，，在组织修复方面具有重大潜力，，，但缺乏合适有用的递送要领。。。对此，，，研究职员系统筛选了针对巨噬细胞的阳离子聚合物，，，开发了一种能够高效递送Cas13核糖核卵白复合物（Cas13 RNP）进入巨噬细胞的纳米簇载体。。。通过反应性氧种（ROS）响应性释放机制，，，该系统能够在肌腱损伤的急性炎症微情形中特异性抑制巨噬细胞中SPP1的过表达。。。实验效果批注，，，这种靶向策略显著镌汰了损伤诱导的SPP1爆发巨噬细胞的泛起，，，降低了成纤维细胞的激活，，，并减轻了肌腱周围的粘连形成。。。别的，，，该研究还展现了SPP1通过CD44/AKT信号通路增进成纤维细胞活化和迁徙的机制，，，并通过抑制这一通路有用缓解了肌腱损伤后的粘连问题。。。
用于PA治疗的巨噬细胞免疫微情形激活mRNA编辑策略的示意图
Electrical stimulation of piezoelectric BaTiO3 coated Ti6Al4V scaffolds promotes anti-inflammatory polarization of macrophage and bone repair via MAPK/JNK inhibition and OXPHOS activation
脊髓损伤（SCI）是一种导致感受自主神经和运动功效的永世性损害的严重致残性疾病。。。干细胞疗法，，，尤其是间充质干细胞（MSCs），，，在SCI治疗中展现出重大潜力但其再生能力有限，，，这限制了其在组织再生中的应用。。。研究团队视察到ABPCs衍生的EVs（EVsABPC）可能携带增进组织再生的生物活性信号，，，因此他们从鹿角芽基祖细胞（ABPCs）中提取并修饰了细胞外囊泡（EVsABPC），，，并将其应用于脊髓损伤（SCI）的治疗研究。。。研究职员发明EVsABPC能够显著增强神经干细胞（NSCs）的增殖，，，增进轴突生长，，，镌汰神经元凋亡，，，并通过调理炎症反应将巨噬细胞从促炎的M1型极化为抗炎的M2型。。。别的，，，经由工程化刷新的EVsABPC（通过激活细胞穿透肽修饰）能够更有用地靶向SCI损伤部位，，，显著改善神经再生和运动功效恢复。。。这些效果批注，，，EVsABPC是一种极具潜力的SCI治疗候选计划。。。
图解摘要
Generation of recombinant antibodies by mammalian expression system for detecting S-metolachlor in environmental waters
S-异丙甲草胺（S-MET）是我国生产和使用量最大的除草剂之一，，，其化学特征导致其可在土壤中长期保存以及容易通过淋溶和沉降污染地表水和地下水，，，最终影响植物生长和通过食物链危害人类生命康健。。。鉴于现有检测要领的局限性和对高效剖析技术的迫切需求，，，该研究以S-metolachlor为工具，，，使用哺乳动物表达系统天生相关重组抗体。。。在乐成表达抗体的基础上，，，乐成建设了基于这些抗体的免疫剖析要领，，，用于监测情形水样中的S-异丙甲草胺残留。。。icELISA效果显示，，，重组抗体的迅速度和特异性与亲本单抗相似，，，可坚持原有的生物学活性，，，关于江水、农田水和自来水中的S-MET，，，具有优异的准确性和重复性。。。
图解摘要
Dumbbell probe initiated multi-rolling circle amplification assisted CRISPR/Cas12a for highly sensitive detection of clinical microRNA
细小RNA（miRNA）是一类小的非编码RNA分子，，，通过与特定靶基因的信使RNA（mRNA）相互作用来调控基因表达。。。miRNA在多种疾病的爆发、生长历程中饰演着主要角色，，，被以为是极具潜力的疾病生物标记物。。。该研究使用CRISPR/Cas12a开发了一种为DBmRCA的新型miRNA检测技术。。。该技术使用无毗连酶的哑铃探针和高迅速度的CRISPR/Cas12a信号输出策略，，，实现了在30分钟内对miRNA的高精度定量剖析。。。研究团队通过临床样本验证了该技术的有用性，，，发明miR-200a和miR-126在肺癌组织中的表达水平显著降低，，，且该技术与古板要领效果一致。。。DBmRCA技术具有时间效率高、迅速度强和操作流程简化等优点，，，为临床miRNA剖析提供了一种可靠的工具，，，有望助力肺癌的早期诊断和治疗。。。
图解摘要
