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GETVV1 E2基因过表达CHO-K1细胞
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货号:
EDJ0033-G11
物种:
仓鼠
细胞名称:
CHO-K1
基因名称:
GETVV1 E2
规格:
1×10?cells
产品介绍
产品属性
| 货号 | EDJ0033 |
|---|---|
| 产品名称 | GETVV1 E2基因过表达细胞(CHO-K1) |
| 基因 | GETVV1 E2 |
| 细胞形态 | 贴壁 |
| 传代比率 | 1/6~1/8, 2days |
| 完全作育基 | F-12K + 10% FBS |
| 冻存作育基 | 95%完全作育基+ 5% DMSO |
细胞苏醒要领
注重：收到的细胞如 24h 内苏醒，，， ，可存放于-80℃冰箱； ；；；；凌驾 24h 请存放于液氮中，，， ，苏醒前 10min 取出，，， ，放于-80℃，，， ，让管中液氮挥发。。。。。
1．水浴锅 37℃预热； ；；；；
2．适合该细胞系的完全作育基温浴到 37℃； ；；；；
3．在 15mL 离心管中加入 6mL 完全作育基备用； ；；；；
4．从-80℃冰箱中取出细胞，，， ，在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，，， ，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，，， ，使细胞在 1min 内迅速解冻（水不可没过盖子或用封口膜把冻存管口封上）； ；；；；
5．将冻存管转移到超净事情台内； ；；；；翻开盖子前，，， ，用 75％酒精擦拭冻存管外部； ；；；；
6．用移液枪吸收细胞冻存悬液，，， ，转移至已预热的完全作育基的离心管内； ；；；；
7．用 1mL 完全作育基洗涤冻存管 1 次，，， ，网络残留细胞，，， ，镌汰损失； ；；；；
8． 细胞悬液以 1100rpm 离心 4min（离心速率和时间取决于细胞种类）
9．离心后，，， ，检查上清液是否清亮，，， ，有无完整的细胞沉淀； ；；；；在无菌条件下，，， ，小心倒掉上清液，，， ，加入 1mL 完全作育基，，， ，轻柔奏乐细胞沉淀，，， ，充分吹散、混匀； ；；；；
10．将细胞平均接种到 1 个 T25 作育瓶或底面积相当的作育容器中。。。。。加入足量完全作育基，，， ，1 个 T25 作育瓶中作育基总量不少于 6mL（现实作育瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数目）； ；；；；
11．摇匀细胞，，， ，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（作育情形取决于细胞和作育基类型）； ；；；；
12．苏醒越日，，， ，视察细胞状态。。。。。
（1）贴壁细胞若细胞贴壁情形优异，，， ，可以替换新鲜的完全作育基； ；；；；若视察到细胞呈圆亮形态但不贴壁，，， ，可以让细胞继续作育 24h 后再举行换液操作。。。。。之后，，， ，凭证细胞的生长状态，，， ，每2-3 天替换一次完全作育基，，， ，视察细胞，，， ，生长至 80％以上的汇合度，，， ，即需传代。。。。。若细胞生长较慢或汇合度较低时，，， ，可以镌汰换液次数。。。。。
（2）悬浮细胞苏醒后只管放在相对小一些的容器中，，， ，使用含 20％血清的作育基苏醒。。。。。悬浮细胞若细胞状态优异，，， ，可以替换新鲜的完全作育基； ；；；；若细胞状态差且泛起灰度，，， ，可以继续作育 72h 后再视察细胞。。。。。视察发明有活细胞，，， ，可举行换液操作，，， ，视察细胞无显着转变，，， ，实时反响本公司售后。。。。。
细胞传代要领
1．将完全作育基、PBS、胰酶预热至 37℃； ；；；；
2．从作育容器中吸弃上清； ；；；；
3．从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS（T25 作育瓶加入约 6mL）洗涤细胞 1 次。。。。。注重行动轻柔，，， ，洗濯周全，，， ，阻止搅动细胞层，，， ，前后摇晃容器数次吸去 PBS（注：冲洗办法可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）； ；；；；
4．加入胰酶（T25 作育瓶加入约 3mL），，， ，迅速铺匀，，， ，包管充分接触细胞外貌。。。。。放入作育箱消化； ；；；；
5．显微镜下视察消化情形，，， ，约 70％～80％细胞缩短变圆后，，， ，轻拍作育容器外壁，，， ，使细胞脱离作育外貌； ；；；；
6．立即加入 2 倍胰酶体积的完全作育基（T25 作育瓶加入约 6mL），，， ，随即轻摇作育容器，，， ，使作育基和胰酶迅速混匀，，， ，终止消化； ；；；；
7．使用移液管吸收细胞悬液，，， ，奏乐作育容器底面数次，，， ，尽可能将细胞都奏乐下来； ；；；；注重：吹感行动不可强烈，，， ，阻止爆发大宗气泡，，， ，损伤和损失细胞。。。。。
8．将细胞悬液转移至离心管中。。。。。用 PBS（T25 作育瓶加入约 3mL）洗涤容器 1 次，，， ，网络残留细胞； ；；；；
9．网络的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min； ；；；；
10．离心后去除上清。。。。。加入 1mL 完全作育基，，， ，轻柔奏乐细胞沉淀，，， ，充分吹散、混匀； ；；；；
11．将细胞按一定的比例传代接种，，， ，建议首次凭证 1：3 举行传代，，， ，若细胞在两天内长满可增添传代比例，，， ，若细胞生长三四天还未长满，，， ，可适当缩小传代比例； ；；；；
注重：请凭证细胞现实生长情形调解传代比例。。。。。
12．摇匀细胞，，， ，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（若是使用作育瓶，，， ，将其放入作育箱前应将瓶盖旋松，，， ，以便举行充分的气体交流，，， ，除非您使用的是通气式作育瓶和透气性瓶盖）； ；；；；
13．传代越日，，， ，视察细胞状态。。。。。若发明较多死细胞，，， ，举行换液操作。。。。。之后，，， ，每凭证细胞的生长情形替换完全作育基，，， ，视察细胞，，， ，生长至 80％以上的汇合度，，， ，即需传代或冻存。。。。。
贮存条件
液氮生涯
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