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说明书 
货号:
EDC03199
物种:
人
细胞名称:
HCT116
基因名称:
KRAS
基因ID:
3845
产品介绍
产品属性
| 货号 | EDC03199 |
|---|---|
| 产品名称 | KRAS(p.Q61H)点突变HCT116细胞株 |
| 物种 | 人 |
| 细胞 | HCT116 |
| 基因 | KRAS |
| 突变位点 | p.Q61H |
| 基因ID |
3845
|
| 传代比率 | 1:4~1:5 |
| 完全作育基 | mcCoy5A+10% FBS |
| 冻存作育基 | 90% FBS/完全作育基+10% DMSO |
细胞苏醒要领
注重：收到的细胞如 24h 内苏醒，，，可存放于-80℃冰箱；；；凌驾 24h 请存放于液氮中，，，苏醒前 10min 取出，，，放于-80℃，，，让管中液氮挥发。。。。。。
1．水浴锅 37℃预热；；；
2．适合该细胞系的完全作育基温浴到 37℃；；；
3．在 15mL 离心管中加入 6mL 完全作育基备用；；；
4．从-80℃冰箱中取出细胞，，，在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，，，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，，，使细胞在 1min 内迅速解冻（水不可没过盖子或用封口膜把冻存管口封上）；；；
5．将冻存管转移到超净事情台内；；；翻开盖子前，，，用 75％酒精擦拭冻存管外部；；；
6．用移液枪吸收细胞冻存悬液，，，转移至已预热的完全作育基的离心管内；；；
7．用 1mL 完全作育基洗涤冻存管 1 次，，，网络残留细胞，，，镌汰损失；；；
8． 细胞悬液以 1100rpm 离心 4min（离心速率和时间取决于细胞种类）
9．离心后，，，检查上清液是否清亮，，，有无完整的细胞沉淀；；；在无菌条件下，，，小心倒掉上清液，，，加入 1mL 完全作育基，，，轻柔奏乐细胞沉淀，，，充分吹散、混匀；；；
10．将细胞平均接种到 1 个 T25 作育瓶或底面积相当的作育容器中。。。。。。加入足量完全作育基，，，1 个 T25 作育瓶中作育基总量不少于 6mL（现实作育瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数目）；；；
11．摇匀细胞，，，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（作育情形取决于细胞和作育基类型）；；；
12．苏醒越日，，，视察细胞状态。。。。。。
（1）贴壁细胞若细胞贴壁情形优异，，，可以替换新鲜的完全作育基；；；若视察到细胞呈圆亮形态但不贴壁，，，可以让细胞继续作育 24h 后再举行换液操作。。。。。。之后，，，凭证细胞的生长状态，，，每2-3 天替换一次完全作育基，，，视察细胞，，，生长至 80％以上的汇合度，，，即需传代。。。。。。若细胞生长较慢或汇合度较低时，，，可以镌汰换液次数。。。。。。
（2）悬浮细胞苏醒后只管放在相对小一些的容器中，，，使用含 20％血清的作育基苏醒。。。。。。悬浮细胞若细胞状态优异，，，可以替换新鲜的完全作育基；；；若细胞状态差且泛起灰度，，，可以继续作育 72h 后再视察细胞。。。。。。视察发明有活细胞，，，可举行换液操作，，，视察细胞无显着转变，，，实时反响本公司售后。。。。。。
细胞传代要领
1．将完全作育基、PBS、胰酶预热至 37℃；；；
2．从作育容器中吸弃上清；；；
3．从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS（T25 作育瓶加入约 6mL）洗涤细胞 1 次。。。。。。注重行动轻柔，，，洗濯周全，，，阻止搅动细胞层，，，前后摇晃容器数次吸去 PBS（注：冲洗办法可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；；；
4．加入胰酶（T25 作育瓶加入约 3mL），，，迅速铺匀，，，包管充分接触细胞外貌。。。。。。放入作育箱消化；；；
5．显微镜下视察消化情形，，，约 70％～80％细胞缩短变圆后，，，轻拍作育容器外壁，，，使细胞脱离作育外貌；；；
6．立即加入 2 倍胰酶体积的完全作育基（T25 作育瓶加入约 6mL），，，随即轻摇作育容器，，，使作育基和胰酶迅速混匀，，，终止消化；；；
7．使用移液管吸收细胞悬液，，，奏乐作育容器底面数次，，，尽可能将细胞都奏乐下来；；；注重：吹感行动不可强烈，，，阻止爆发大宗气泡，，，损伤和损失细胞。。。。。。
8．将细胞悬液转移至离心管中。。。。。。用 PBS（T25 作育瓶加入约 3mL）洗涤容器 1 次，，，网络残留细胞；；；
9．网络的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min；；；
10．离心后去除上清。。。。。。加入 1mL 完全作育基，，，轻柔奏乐细胞沉淀，，，充分吹散、混匀；；；
11．将细胞按一定的比例传代接种，，，建议首次凭证 1：3 举行传代，，，若细胞在两天内长满可增添传代比例，，，若细胞生长三四天还未长满，，，可适当缩小传代比例；；； 注重：请凭证细胞现实生长情形调解传代比例。。。。。。
12．摇匀细胞，，，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（若是使用作育瓶，，，将其放入作育箱前应将瓶盖旋松，，，以便举行充分的气体交流，，，除非您使用的是通气式作育瓶和透气性瓶盖）；；；
13．传代越日，，，视察细胞状态。。。。。。若发明较多死细胞，，，举行换液操作。。。。。。之后，，，每凭证细胞的生长情形替换完全作育基，，，视察细胞，，，生长至 80％以上的汇合度，，，即需传代或冻存。。。。。。
贮存条件
液氮生涯
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