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说明书 
货号:
EDC01262
物种:
人
规格:
1×10?cells
细胞名称:
MDA-MB-231
产品介绍
产品属性
| 货号 | EDC01262 |
|---|---|
| 产品名称 | 人乳腺癌细胞（MDA-MB-231-Cas9） |
| 物种 | 人 |
| 细胞 | MDA-MB-231 |
| 细胞形态 | 贴壁生长 |
| 消化时间 | 2~3 min |
| 完全作育基 | DMEM+10% FBS |
| 冻存作育基 | 92% 完全作育基+8% DMSO |
STR 判断
| Loci | 送检细胞STR信息 送检细胞名: MDA-MB-231 |
细胞库细胞STR信息 细胞库细胞名: MDA-MB-231 |
||
| Allele1 | Allele2 | Allele1 | Allele2 | |
| Amelogenin | X | X | ||
| CSF1PO | 12 | 13 | 12 | 13 |
| D5S818 | 12 | 12 | ||
| D7S820 | 8 | 9 | 8 | 9 |
| D13S317 | 13 | 13 | ||
| D16S539 | 12 | 12 | ||
| TPOX | 8 | 9 | 8 | 9 |
| vWA | 15 | 18 | 15 | 18 |
结论：该细胞 STR 判断准确。。。
细胞苏醒要领
注重：收到的细胞如 24h 内苏醒，， ，，可存放于-80℃冰箱；；；；；；凌驾 24h 请存放于液氮中，， ，，苏醒前 10min 取出，， ，，放于-80℃，， ，，让管中液氮挥发。。。
1．水浴锅 37℃预热；；；；；；
2．适合该细胞系的完全作育基温浴到 37℃；；；；；；
3．在 15mL 离心管中加入 6mL 完全作育基备用；；；；；；
4．从-80℃冰箱中取出细胞，， ，，在 37℃水浴中轻轻转动冻存管，， ，，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯，， ，，使细胞在 1min 内迅速解冻（水不可没过盖子或用封口膜把冻存管口封上）；；；；；；
5．将冻存管转移到超净事情台内；；；；；；翻开盖子前，， ，，用 75％酒精擦拭冻存管外部；；；；；；
6．用移液枪吸收细胞冻存悬液，， ，，转移至已预热的完全作育基的离心管内；；；；；；
7．用 1mL 完全作育基洗涤冻存管 1 次，， ，，网络残留细胞，， ，，镌汰损失；；；；；；
8． 细胞悬液以 1100rpm 离心 4min（离心速率和时间取决于细胞种类）
9．离心后，， ，，检查上清液是否清亮，， ，，有无完整的细胞沉淀；；；；；；在无菌条件下，， ，，小心倒掉上清液，， ，，加入 1mL 完全作育基，， ，，轻柔奏乐细胞沉淀，， ，，充分吹散、混匀；；；；；；
10．将细胞平均接种到 1 个 T25 作育瓶或底面积相当的作育容器中。。。加入足量完全作育基，， ，，1 个 T25 作育瓶中作育基总量不少于 6mL（现实作育瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数目）；；；；；；
11．摇匀细胞，， ，，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（作育情形取决于细胞和作育基类型）；；；；；；
12．苏醒越日，， ，，视察细胞状态。。。
（1）贴壁细胞若细胞贴壁情形优异，， ，，可以替换新鲜的完全作育基；；；；；；若视察到细胞呈圆亮形态但不贴壁，， ，，可以让细胞继续作育 24h 后再举行换液操作。。。之后，， ，，凭证细胞的生长状态，， ，，每2-3 天替换一次完全作育基，， ，，视察细胞，， ，，生长至 80％以上的汇合度，， ，，即需传代。。。若细胞生长较慢或汇合度较低时，， ，，可以镌汰换液次数。。。
（2）悬浮细胞苏醒后只管放在相对小一些的容器中，， ，，使用含 20％血清的作育基苏醒。。。悬浮细胞若细胞状态优异，， ，，可以替换新鲜的完全作育基；；；；；；若细胞状态差且泛起灰度，， ，，可以继续作育 72h 后再视察细胞。。。视察发明有活细胞，， ，，可举行换液操作，， ，，视察细胞无显着转变，， ，，实时反响本公司售后。。。
细胞传代要领
1．将完全作育基、PBS、胰酶预热至 37℃；；；；；；
2．从作育容器中吸弃上清；；；；；；
3．从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS（T25 作育瓶加入约 6mL）洗涤细胞 1 次。。。注重行动轻柔，， ，，洗濯周全，， ，，阻止搅动细胞层，， ，，前后摇晃容器数次吸去 PBS（注：冲洗办法可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；；；；；；
4．加入胰酶（T25 作育瓶加入约 3mL），， ，，迅速铺匀，， ，，包管充分接触细胞外貌。。。放入作育箱消化；；；；；；
5．显微镜下视察消化情形，， ，，约 70％～80％细胞缩短变圆后，， ，，轻拍作育容器外壁，， ，，使细胞脱离作育外貌；；；；；；
6．立即加入 2 倍胰酶体积的完全作育基（T25 作育瓶加入约 6mL），， ，，随即轻摇作育容器，， ，，使作育基和胰酶迅速混匀，， ，，终止消化；；；；；；
7．使用移液管吸收细胞悬液，， ，，奏乐作育容器底面数次，， ，，尽可能将细胞都奏乐下来；；；；；；注重：吹感行动不可强烈，， ，，阻止爆发大宗气泡，， ，，损伤和损失细胞。。。
8．将细胞悬液转移至离心管中。。。用 PBS（T25 作育瓶加入约 3mL）洗涤容器 1 次，， ，，网络残留细胞；；；；；；
9．网络的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min；；；；；；
10．离心后去除上清。。。加入 1mL 完全作育基，， ，，轻柔奏乐细胞沉淀，， ，，充分吹散、混匀；；；；；；
11．将细胞按一定的比例传代接种，， ，，建议首次凭证 1：3 举行传代，， ，，若细胞在两天内长满可增添传代比例，， ，，若细胞生长三四天还未长满，， ，，可适当缩小传代比例；；；；；；
注重：请凭证细胞现实生长情形调解传代比例。。。
12．摇匀细胞，， ，，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（若是使用作育瓶，， ，，将其放入作育箱前应将瓶盖旋松，， ，，以便举行充分的气体交流，， ，，除非您使用的是通气式作育瓶和透气性瓶盖）；；；；；；
13．传代越日，， ，，视察细胞状态。。。若发明较多死细胞，， ，，举行换液操作。。。之后，， ，，每凭证细胞的生长情形替换完全作育基，， ，，视察细胞，， ，，生长至 80％以上的汇合度，， ，，即需传代或冻存。。。
贮存条件
液氮生涯
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