完美真人
产品概述
Flash极速敲除试剂盒（通用版）通过递送预组装的递送载体、Cas9卵白与sgRNA复合物（RNP），，，，实现高效、精准的基因敲除，，，，是一款专为科研用户定制研发的即用型基因敲除试剂盒。。。。。该产品包括完美真人立异研发的 CRISPR RNP 递送载体以及经数千例实战验证过的 Cas 酶，，，，经由特殊处置惩罚的递送载体-RNP 复合物能够在哺乳动物细胞中爆发高效的基因组编辑。。。。。
贮存条件及有用期
有用期6个月，，，，贮存条件-80°C，，，，干冰运输。。。。。建议凭证使用次数举行分装，，，，阻止重复冻融。。。。。
产品组分
| 产品编号 | 组分 | 规格 | 20T |
| EDKO-K04-50 | 递送载体-RNP 复合物 | 50 μL（足够 5 个 24 孔） | 24 孔板，，，，10 μL/孔 |
| EDKO-K04-100 | 递送载体-RNP 复合物 | 100 μL（足够 5 个 12 个孔） | 12 孔板，，，，20 μL/孔 |
注重:本产品只提供一体化的递送载体-RNP 复合物，，，，客户需要提供 sgRNA 序列。。。。。
可选组分
| 编号 | 可选项 | 备注 |
| 1 | SgRNA 设计 | 完美真人提供 sgRNA 序列设计效劳 |
| 2 | 阳性比照 | 人 B2M 基因 递送载体-RNP 复合物 |
实验办法
- 1.细胞作育和铺板（以24孔板为例）
- 细胞作育至生长兴旺状态，，，，转染前24 h，，，，接种细胞至24孔板（关于贴壁细胞，，，，使转染时细胞汇合度为50%~60%；；；；；关于悬浮细胞，，，，使转染时细胞数目为1.2×105~1.6×105）。。。。。
- 请使用生长状态较好的细胞，，，，并确保细胞无细菌、真菌或支原体污染。。。。。若是细胞是近期苏醒的液氮冻存细胞，，，，请在转染前至少传代两次。。。。。
- 2. 细胞转染
- 提前将载体-RNP 复合物从 -80℃ 转移至4 ℃ 缓慢解冻，，，，每孔加入10 μL 加入时分多次缓慢加入，，，，加入后轻轻晃动混匀。。。。。
- 关于贴壁细胞的要求：细胞状态好，，，，漫衍匀称，，，，汇合度为50%~60%，，，，则可直接加入本产品；；；；；
- 关于悬浮细胞的要求：细胞状态好，，，，加入载体-RNP复合物前需将细胞团轻柔吹散，，，，疏散匀称后直接加入本产品。。。。。
- 3. 剖析转染细胞
- 转染48h后，，，，提取所转染细胞的基因组，，，，使用特异性引物扩增靶标区域(扩增子包括sgRNA靶向切割的位置)；；；；；
- 使用TIDE (剖析网址：https://tide.nki.nl/)或者ICE (剖析网址：https://ice.synthego.com/#/，，，，使用说明：https://www.synthego.com/guide/how-to-use-crispr/ice-analysis-guide) 等工具举行基因编辑效率剖析。。。。。
高效编辑效果展示
图1 高效编辑细胞展示图
图 2 Jurkat (B2M) 多克隆 ICE 剖析效果
图 3 HEK293T（B2M）多克隆 ICE 剖析效果
FAQ
为何对细胞的损伤较量小�。。。。�？？？ ？？
本产品接纳先进的生物分子转染技术，，，，相比古板化学转染法的毒性及电转法的物理攻击，，，，具有显著优势。。。。。
怎样证实无需筛选仍能获得高编辑效率？？？？ ？？
本产品已在多个细胞上验证，，，，RNP系统在转染后4小时内即进入细胞施展作用，，，，Cas9卵白在24-48小时降解，，，，通过瞬时高效表达实现编辑，，，，无需一连筛选。。。。。
能否在悬浮细胞中抵达相同效率？？？？ ？？
通常而言，，，，悬浮细胞转染难度相对较大。。。。。然而，，，，本产品依附卓越性能，，，，不但适用于贴壁细胞，，，，在悬浮细胞中同样体现精彩。。。。。以 Jurkat 细胞为例，，，，转染 48h 后即可实现高达 97% 的编辑效率，，，，充分彰显了本产品在悬浮细胞转染方面的高效率优势，，，，可充分知足您对悬浮细胞转染的高标准需求。。。。。
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