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货号:
EDC00124
物种:
牛
细胞名称:
MAC-T
规格:
1×10?cells
产品介绍
产品属性
| 货号 | EDC00124 |
|---|---|
| 细胞名称 | Mac-T 牛乳腺上皮细胞 |
| 细胞形态 | 贴壁生长 |
| 消化时间 | 2~3 min |
| 传代比例 | 1:5 |
| 完全作育基 | 1640+10% FBS |
| 冻存作育基 | 70% 完全作育基+20% FBS+10% DMSO |
细胞苏醒要领
注重：收到的细胞如 24h 内苏醒 ，，，， ，可存放于-80℃冰箱；；；；；；凌驾 24h 请存放于液氮中 ，，，， ，苏醒前 10min 取出 ，，，， ，放于-80℃ ，，，， ，让管中液氮挥发。。。。。。
1．水浴锅 37℃预热；；；；；；
2．适合该细胞系的完全作育基温浴到 37℃；；；；；；
3．在 15mL 离心管中加入 6mL 完全作育基备用；；；；；；
4．从-80℃冰箱中取出细胞 ，，，， ，在 37℃水浴中轻轻转动冻存管 ，，，， ，直到冻存管内仅剩余一小块冰芯 ，，，， ，使细胞在 1min 内迅速解冻（水不可没过盖子或用封口膜把冻存管口封上）；；；；；；
5．将冻存管转移到超净事情台内；；；；；；翻开盖子前 ，，，， ，用 75％酒精擦拭冻存管外部；；；；；；
6．用移液枪吸收细胞冻存悬液 ，，，， ，转移至已预热的完全作育基的离心管内；；；；；；
7．用 1mL 完全作育基洗涤冻存管 1 次 ，，，， ，网络残留细胞 ，，，， ，镌汰损失；；；；；；
8． 细胞悬液以 1100rpm 离心 4min（离心速率和时间取决于细胞种类）
9．离心后 ，，，， ，检查上清液是否清亮 ，，，， ，有无完整的细胞沉淀；；；；；；在无菌条件下 ，，，， ，小心倒掉上清液 ，，，， ，加入 1mL 完全作育基 ，，，， ，轻柔奏乐细胞沉淀 ，，，， ，充分吹散、混匀；；；；；；
10．将细胞平均接种到 1 个 T25 作育瓶或底面积相当的作育容器中。。。。。。加入足量完全作育基 ，，，， ，1 个 T25 作育瓶中作育基总量不少于 6mL（现实作育瓶尺寸取决于冻存管冻存的细胞数目）；；；；；；
11．摇匀细胞 ，，，， ，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（作育情形取决于细胞和作育基类型）；；；；；；
12．苏醒越日 ，，，， ，视察细胞状态。。。。。。
（1）贴壁细胞若细胞贴壁情形优异 ，，，， ，可以替换新鲜的完全作育基；；；；；；若视察到细胞呈圆亮形态但不贴壁 ，，，， ，可以让细胞继续作育 24h 后再举行换液操作。。。。。。之后 ，，，， ，凭证细胞的生长状态 ，，，， ，每2-3 天替换一次完全作育基 ，，，， ，视察细胞 ，，，， ，生长至 80％以上的汇合度 ，，，， ，即需传代。。。。。。若细胞生长较慢或汇合度较低时 ，，，， ，可以镌汰换液次数。。。。。。
（2）悬浮细胞苏醒后只管放在相对小一些的容器中 ，，，， ，使用含 20％血清的作育基苏醒。。。。。。悬浮细胞若细胞状态优异 ，，，， ，可以替换新鲜的完全作育基；；；；；；若细胞状态差且泛起灰度 ，，，， ，可以继续作育 72h 后再视察细胞。。。。。。视察发明有活细胞 ，，，， ，可举行换液操作 ，，，， ，视察细胞无显着转变 ，，，， ，实时反响本公司售后。。。。。。
细胞传代要领
1．将完全作育基、PBS、胰酶预热至 37℃；；；；；；
2．从作育容器中吸弃上清；；；；；；
3．从容器一侧轻轻加入冲洗液 PBS（T25 作育瓶加入约 6mL）洗涤细胞 1 次。。。。。。注重行动轻柔 ，，，， ，洗濯周全 ，，，， ，阻止搅动细胞层 ，，，， ，前后摇晃容器数次吸去 PBS（注：冲洗办法可去除可能抑制解离剂作用的少量血清、钙和镁）；；；；；；
4．加入胰酶（T25 作育瓶加入约 3mL） ，，，， ，迅速铺匀 ，，，， ，包管充分接触细胞外貌。。。。。。放入作育箱消化；；；；；；
5．显微镜下视察消化情形 ，，，， ，约 70％～80％细胞缩短变圆后 ，，，， ，轻拍作育容器外壁 ，，，， ，使细胞脱离作育外貌；；；；；；
6．立即加入 2 倍胰酶体积的完全作育基（T25 作育瓶加入约 6mL） ，，，， ，随即轻摇作育容器 ，，，， ，使作育基和胰酶迅速混匀 ，，，， ，终止消化；；；；；；
7．使用移液管吸收细胞悬液 ，，，， ，奏乐作育容器底面数次 ，，，， ，尽可能将细胞都奏乐下来；；；；；；注重：吹感行动不可强烈 ，，，， ，阻止爆发大宗气泡 ，，，， ，损伤和损失细胞。。。。。。
8．将细胞悬液转移至离心管中。。。。。。用 PBS（T25 作育瓶加入约 3mL）洗涤容器 1 次 ，，，， ，网络残留细胞；；；；；；
9．网络的所有细胞悬液以 1100rpm 离心 4min；；；；；；
10．离心后去除上清。。。。。。加入 1mL 完全作育基 ，，，， ，轻柔奏乐细胞沉淀 ，，，， ，充分吹散、混匀；；；；；；
11．将细胞按一定的比例传代接种 ，，，， ，建议首次凭证 1：3 举行传代 ，，，， ，若细胞在两天内长满可增添传代比例 ，，，， ，若细胞生长三四天还未长满 ，，，， ，可适当缩小传代比例；；；；；；
注重：请凭证细胞现实生长情形调解传代比例。。。。。。
12．摇匀细胞 ，，，， ，放入 37℃、5％CO2、饱和湿度的作育箱中（若是使用作育瓶 ，，，， ，将其放入作育箱前应将瓶盖旋松 ，，，， ，以便举行充分的气体交流 ，，，， ，除非您使用的是通气式作育瓶和透气性瓶盖）；；；；；；
13．传代越日 ，，，， ，视察细胞状态。。。。。。若发明较多死细胞 ，，，， ，举行换液操作。。。。。。之后 ，，，， ，每凭证细胞的生长情形替换完全作育基 ，，，， ，视察细胞 ，，，， ，生长至 80％以上的汇合度 ，，，， ，即需传代或冻存。。。。。。
贮存条件
液氮生涯
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